Международный неврологический журнал 1 (31) 2010

Профилактика генетически обусловленных болезней может быть первичной (предотвращение возникновения патологического генотипа на уровне гамет и зигот), вторичной (пре- и постнатальное предотвращение патологии) и третичной (лечение наследственных болезней и врожденных пороков развития). В странах с высокой рождаемостью состояние здоровья подрастающего поколения имеет особое значение, поэтому так важна профилактика наследственных болезней и дефектов, которая должна быть основой политики народонаселения и планирования семьи [1].

Среди недоношенных детей очень высок уровень заболеваемости и смертности. Однако исследования результатов замера генетического фона все больше привлекают ученых [2]. Ввиду явного различия в подверженности заболеваниям детей, родившихся со слишком низким весом, недостаточности достоверных дородовых прогнозов неблагоприятных первичных результатов, например развития кровоизлияния в желудочки головного мозга, перивентрикулярной лейкомаляции (ПВЛ), мы считаем возможным, что генетические варианты факторов свертываемости могут играть роль в развитии определенных заболеваний у детей, родившихся со слишком малым весом [3]. Последние исследования показали влияние факторов тромбофилического риска, таких как фактор V Лейдена и мутация протромбина G20210A, на развитие внутричерепных кровоизлияний и ПВЛ у недоношенных детей. Напротив, генетически обоснованные низкие уровни факторов свертываемости, такие как полиморфизм стимулятора фактора VII-323del/ins, могут не только увеличить риск внутричерепного кровоизлияния (как показали исследования у взрослых), но и влиять на расстройство мозгового кровообращения у преждевременно родившихся детей, например на развитие перивентрикулярной лейкомаляции [3].

Исследование генетических ассоциаций большого числа комплексных заболеваний проводится для определения групп повышенного риска. Тромбофилические расстройства включают мутацию фактора V Лейдена, которая делает фактор V устойчивым к расщеплению активированного протеина С, и мутации протромбина G20210A, связанные с повышенной концентрацией протромбина в плазме. Сбалансированность гемостаза определяется зависимостью структуры фибрина тромба от активности фактора XIII [4, 5]. Фактор XIII катализирует образование связей между фибринами мономеров и включает различные адгезивные и антифибринолитические протеины в окончательный фибрин тромба, что повышает его механическую прочность. Было проведено несколько исследований функционального влияния фактора XIII полиморфизмов гена на структуру фибринового сгустка и риск гемостатического дисбаланса (исследования Коббервига и Вильямса). Полиморфизм фактора XIII-Val34Leu является наиболее изученным генетическим вариантом, т.к. перенесение аллеля фактора XIII-Leu34 биохимически связано с образованием сетчатой структуры фибрина с более тонкими волокнами, меньшими порами и изменением характеристик проникновения по сравнению со сгустками фибрина, образующимися при гомозиготности фактора XIII-Val34Leu [6, 7]. Воздействие концентраций протромбина на структуру сгустков показывает, что более тонкие сгустки более устойчивы к фибринолизу и сопутствующему повышенному риску развития тромбоза. Было описано много полиморфизмов, связанных с изменением уровней фактора свертываемости VII. Два полиморфизма оказались связанными с повышением уровней фактора VII и риска церебро-васкулярных заболеваний (фактор VII-C122T). Другие генетические варианты фактора VII, включая полиморфизм интрона 7 и R353Q, связаны со снижением уровней фактора VII, которые могут оказывать самое различное влияние на гемостатический баланс (исследовано Мариани и др.). Стимулятор фактора VII-323del/ins (323 A1/A2) приводит к 20% снижению коэффициента деятельности коагулянта фактора VII [8].

Воздействие полиморфизма фактора XIII-Val34Leu на неврологический краткосрочный исход у детей, родившихся со слишком низким весом, проявляется в том, что у детей — носителей полиморфизма фактора XIII-Val34Leu повышается риск нарушений белого вещества мозга (ПВЛ I–II ст.). Кроме того, аллели фактора XIII-Leu34 могут быть защитным фактором при рождении детей со сроком гестации 23 недели.

Для подтверждения предварительных исследований влияния генетических связей на церебро-васкулярные нарушения мы изучили воздействие генетических вариантов, биохимически связанных с гемостазом (фактор V Лейдена, протромбин G20210A, фактор VII 323 del/ins и фактор XIII-Val34Leu), на большое количество детей, родившихся с недостаточным весом.

Материалы и методы исследования

Изучение влияния вариантов генов, участвующих в гемостазе, у детей, родившихся со слишком маленьким весом, проводилось на 200 новорожденных, родившихся в НИИ акушерства и гинекологии МЗ РУз, а также в отделении ОПН № 5 больницы Мирабадского района с 2007 по 2009 год. Дети включались в исследование по таким критериям: срок гестации от 28 до 36 недель, вес при рождении < 1500 г ; исключались летальные мальформации, хромосомно-наследственные заболевания: трисомия 13 и трисомия 18. Недоношенные дети, родившиеся со сроком гестации 23–26 недель, не включались в наше исследование, так как процент смертности в этой группе очень высок. У многих гомозиготных единоутробных детей был идентичный генетический фон порядка 50–100 %. Это большое генетическое влияние вносит путаницу в клинические данные, т.е. генотипные/фенотипные связи чаще отмечаются у детей, которые рождены от смешанного брака. Тем не менее эти связи могут возникать из-за других генетических факторов, которые не исследовались. Для этого были взяты распределенные по соответствующим номерам образцы ДНК детей.

Клинико-лабораторные методы исследований включали анализ акушерско-гинекологического и соматического анамнеза матерей, течения настоящей беременности, данные рентгенографии грудной клетки, нейросонографии и допплерографии сосудов головного мозга, а также других исследований в сочетании с общепринятой тактикой наблюдения за новорожденными.

Результаты и их обсуждение

В группе детей, родившихся от родителей узбекской популяции, генотипирование было успешным в 73 случаях (фактор Лейдена), 76 случаев — мутация протромбина G20210A, 74 — полиморфизм фактора VII-323del/ins) и 78 — фактор XIII-Val34Leu; 98-99 %. Распределение полиморфизма генов гемостаза у детей, родившихся с очень недостаточным весом, составило равенство Харди — Вайнберга.

При обследовании детей, родившихся с перивентрикулярной лейкомаляцией, проявлявшейся как повышением эхоплотности, так и более выраженными изменениями, которые со временем могут перейти в порэнцефалические кисты, перивентрикулярные кровоизлияния (ПИВК) можно было разделить по степени обширности очага.

Генотипирование

Все полиморфизмы обнаруживались посредством полимеразной цепной реакции и рестрикционного анализа. Праймеры и ДНК-последовательности были отобраны. Полимеразная цепная реакция для мутации фактора V Лейдена и протромбина G20210A производилась, как описано ранее. Пары праймеров для обнаружения полиморфизма фактора XIII-Val34Leu были 5'' CAT GCC TTT TCT GTT GTC TTC-3'' и 5''-ТАС СТТ GCA GGT TGA CGC CCC GGG GCA CTA-3'' (Ddel-digest); 5 -GGC CTG GTC TGG AGG CTC TCT TC-3'' и 5''-GAG CGG ACG GTT TTG TTG CCA CCG-3''(Ddel-digest); 5'' GGC CTG GTC TGG AGG CTC TCT TC -3'' и 5''-GAG CGG ACG GTT TTG TTG CCA GCG-3'' (Hind III digest) для мутации фактора VII-323del/ins.

Выявленные данные достаточны для определения разницы между количеством носителей среди детей, родившихся с недостаточным весом, и исследованных здоровых детей в следующих показателях: 5 % протромбин G20210A и фактор XIII-Val34Leu, до 9 % фактор VII ins/del.

Выводы

В узбекской популяции ожидаемое количество носителей гомозиготного или гетерозиготного фактора V Лейдена составляет 4,9 %, протромбина G20210A — 3,0 %, фактора VII-121del/ins — 19,9 % и гомозиготного полиморфизма фактора Val34Leu — 3 %. В этой популяции генотипирование было успешным в 73 случаях (фактор Лейдена), 76 случаев — мутация протромбина G20210A, 74 — полиморфизм фактора VII-323del/ins и 78 — фактор XIII-Val34Leu; 98-99 %. Распределение полиморфизма генов гемостаза у детей, родившихся с очень недостаточным весом, составило равенство Харди — Вайнберга.

В заключение следует подчеркнуть, что негативные последствия технологических революций, воздействие экологически вредных факторов могут и должны быть смягчены путем широкого и повседневного контроля за мутагенной опасностью, развития медико-генетической помощи населению, предусматривающей распространение методов генетического консультирования и пренатальной диагностики, путем улучшения способов лечения ПВЛ.